猪瘟及猪大肠杆菌混合感染的诊断
发布: 2010-04-03 | 作者: 钱义明 | 来源: 《中国兽医杂志》
近几年北京地区猪瘟和猪大肠杆菌病发病比较普遍，就我所记录2003年共接诊猪病料147次，其中单纯性猪瘟占猪病的62%、单纯性猪大肠杆菌病占5%、而猪瘟和大肠杆菌两病混合感染的占24%，其他疾病占9%。可见，猪瘟和大肠杆菌病严重危害着养猪业的发展，应引起兽医界的重视。2003年10月北京通州区某养猪场45日龄的猪突然发病，先后陆续死亡了17头，据了解在仔猪20日龄时曾注射过猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗。发病猪体温升高到41℃以上，然后下降，最后又上升呈稽留热，病程一般在5～6天左右，精神沉郁，食欲减退，结膜潮红，齿龈溃疡，耳、腹下、四肢、背部、会阴等部位皮下有不同程度的出血，呈紫红色。病猪腹泻、消瘦，后期行走无力，摇晃，站立困难，最后衰竭死亡，病死率在70%以上。
1 病理剖检
皮下组织（脂肪、肌肉）普遍出血，肺脏部分出血、瘀血，心脏外膜、内膜和冠状沟有大小不等的出血点。脾脏周边梗死呈暗紫色。肾脏呈土黄色，皮质部有散在针尖大的出血点，髓质出血。颌下淋巴结、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结肿大、出血，切面呈红白相间的大理石样。喉头、气管出血。胃底黏膜大面积出血、溃疡，小肠黏膜出血，黏膜水肿，部分脱落，壁较薄，胃、肠内容物腥臭，结肠黏膜出血、溃疡。
2 病原诊断
2.1 猪瘟荧光抗体诊断 取病死猪扁桃体和肾组织放入BRIGHT冰冻切片机冷冻、切片若干张附着在载玻片上，用丙酮固定15 min，自然干燥后，在载玻片上滴加猪瘟荧光抗体。放在湿盒中37℃作用30 min，PBS浸洗3次，每次5 min，自然干燥后，在暗室里用荧光显微镜镜检，在切片组织胞浆中可见到亮绿色和黄绿色的荧光显现，由此证明该病死猪的脏器中含有猪瘟病毒。
2.2 细菌的分离鉴定
(1)取病死猪的肺、肝、脾、肠系膜淋巴结无菌操作接种到普通琼脂培养基中，放入恒温箱37℃培养24 h。琼脂培养基菌落灰黄色、不透明、圆形凸起、边缘不整齐、大而湿润，挑取单个菌落革兰氏染色镜检呈革兰氏阴性短粗的杆菌，长约3 μm，宽0.4 μm。挑取单个菌落接种到麦康凯和肉汤培养基，37℃培养24 h，麦康凯培养基菌落呈红色，肉汤培养基中呈均匀混浊生长。
(2)用菌液腹腔接种2只小鼠，每只注射0.15 ml，取无菌生理盐水0.15 ml腹腔接种小鼠做对照。接种菌液的小鼠分别在18 h和22 h死亡，剖检小鼠可见心肌、肺脏出血，肝瘀血，脾脏出血，小肠黏膜出血，将病料接种到麦康凯培养基上37℃培养24 h菌落呈红色。对照组小鼠健康。
(3)挑取普通琼脂菌落混均于0.5%氯化钠溶液做成菌悬液，于病原性大肠杆菌分组OK(或OB)多价血清与O分型血清做玻片凝集，与OK分型血清发生凝集而与O分型血清不凝集说明该菌株有K抗原，然后将菌液于100℃水域中加热15 min，破坏K抗原，在与OK与O分型血清检查得知该菌属于O101型（参照《食品病原微生物检验技术手册》）。
(4)吸0.45%氯化钠液2.0 ml加入到基物安培管中，将管放到VITEK比浊仪中调零，然后用铂金耳挑取单个菌落与基物安培管的稀释液混匀，制成1.0McFarland菌悬液（相当于含菌3×108个/ml），将调好的菌悬液吸附到GNI+和GNS-120药敏鉴定卡上插到细菌生化鉴定仪中反应2～12 h。结果：三氯新-，乙酰胺-，克氏尿素酶-，苯丙氨酸-，麦芽糖+，棉子糖-，肌醇-，硫化氢-，阿拉伯糖+，赖氨酸+，葡萄糖氧化+，七叶苷-，西蒙氏枸橼酸盐-，多粘菌素-，甘露醇+，山梨醇+，侧金盏花醇-，β半乳糖苷酶+，葡萄糖发酵+，鸟氨酸-，阳性生长控制+，植物尿蓝母-，丙二酸盐-，乳糖+，木糖+，蔗糖-，香豆酸+，鼠李糖+，精氨酸-，氧化酶-。符合大肠埃希氏菌的生化特征。
2.3 药敏试验结果 见表1。
根据以上流行病学、病理剖检和实验室检验，诊断本病为猪瘟和猪大肠杆菌混合感染。
3 防制
病死猪进行深埋处理；对全场进行猪瘟病毒检测，猪瘟病毒携带者、病猪隔离、淘汰；用0.5%灭毒净、2%氢氧化钠等对周围环境、猪舍、用具及排泄物进行消毒；猪群紧急接种猪瘟兔化弱毒苗，对已经发病的猪加5～6倍的剂量多点注射； 根据药敏试验，用庆大霉素、头孢曲松和磺胺嘧啶对症治疗。
表1 药敏试验结果
抗生素 最低抑菌浓度 结果 抗生素 最低抑菌浓度
结果
（μg/ml） （μg/ml）
氨苄西林 ≥32 耐药 环丙沙星 ≥4 耐药
氨曲南 ≥32 耐药 庆大霉素 2 敏感
头孢唑啉 ≤8 敏感 亚胺培南 ≤4 敏感
头孢吡肪 ≤4 敏感 左氟沙星 2 敏感
头孢替坦 ≤16 敏感 哌抗西林 ≥128 耐药
头孢他啶 16 中度敏感 妥布拉霉素 ≤0.5 敏感
头孢曲松 ≤8 敏感 磺胺 ≤10 敏感
由于采取了以上措施，经过5天控制了疫情，病猪恢复正常。
4 小结
建议把猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联苗改用单苗分别免疫，仔猪产后用猪瘟兔化弱毒苗做乳前免疫，免疫后1.5～2.0 h后方可吃初乳；监测母猪猪瘟抗体，不合格的要及时补种疫苗；坚持自繁自养原则，如果须从场外引进，必须经过检测，防止携带猪瘟病毒的猪引入；大肠杆菌除用药物对症治疗外，在预防上有猪大肠杆菌苗包括大肠三价、K88、K99应合理使用。如果条件允许，可以做大肠杆菌自家苗，免疫接种。
