猪苓纯菌种的分离培养
发布: 2014-11-21 | 作者: 佚名 | 来源: 转载
1 猪苓纯菌种的分离培养
猪苓菌种同其它菌种一样，也是经过菌种分离（组织分离、孢子分离）而获得菌种，一般是采用野生或家种猪苓菌核分离或夏季雨后湿热天气采集猪苓子实体（俗称“猪苓花”或千层蘑菇）进行组织分离以及担孢子分离。
1.1 母种分离
1.1.1 制备培养基
采用PDA培养基或麸皮-葡萄糖培养基均可。①PDA培养基：马铃薯（削皮）200g，葡萄糖20g，琼脂12～15g，水1000mL，pH5.0～6.0。②麸皮-葡萄糖培养基：麸皮50g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1.5g，琼脂l2～15g，水1000mL培养基的制作和灭菌与常规方法相同。
1.1.2 分离方法
1.1.2.1 组织分离法有菌核分离和子实体分离
菌核分离：猪苓菌子实体采集受季节、天气影响有诸多不便，获得菌种多采用菌核分离，将菌核表面洗净，用75%的酒精消毒后，切开菌核，取中间黄豆粒大小的1块组织，无菌条件下接种到试管斜面上，在15～20℃的适温下培养，产生菌丝后进行分离纯化。子实体分离：利用子实体内部组织进行分离，是获得优质菌种的最好方法。选择七八分成熟、性状优良的子实体做种菇，用无菌水冲冼几次，并用无水滤纸吸干，然后把种菇撕开，用消毒小刀在菌盖与菌柄交界处或菌褶处切取一小块组织，用接种针将组织放入装有培养基的试管斜面中间，适温培养，当组织块上产生菌丝，并向培养基四周生长时，即可挑取斜面上菌丝的生长点进行转管和纯化。
1.1.2.2 孢子分离法
孢子分离要选择成熟度高，将要散孢子的优良子实体做种菇，通常采用钩悬法进行孢子分离，将种菇消毒后，取成熟子实体菌盖的几片菌褶，用无菌不锈钢丝悬挂于三角瓶（或广口瓶）内的培养基上方，勿使它接触到培养基和四周瓶壁。将瓶置于20℃的恒温箱中培养，待成熟的孢子落到培养基上，立刻在无菌条件下移去菌褶，孢子继续在瓶中培养，当长出菌丝后进行转管培养。猪苓菌种分离培养必须组织分离和孢子分离交替进行，至少三年进行一次孢子分离恢复其种性，据笔者调查长期的无性繁育是猪苓减产的最主要原因之一。
1.1.3 菌种纯化培养
在平板培养皿或试管培养基上最初分离出的菌种，经过选择后再进行纯化培养，以获得质量优良的纯菌种。菌种的纯化操作同样在无菌条件下进行，当猪苓在培养基上产生齐头并进的菌丝时，立即用接种针挑取其中长势旺盛菌丝茎尖部分，置于斜面试管培养基中央，在20℃恒温下培养10d左右，当菌丝长满整个培养基时，便是纯菌种即母种。
1.2 原种、栽培种的培养
原种基本配方：杂木屑78%，麸皮20%，蔗糖1%，石膏1%，水分55%～60%。获得母种后，一般制种户就能生产猪苓原种，因猪苓菌丝生长较慢，菌丝纤细，宜用透明玻璃瓶生产原种，以便观察去杂。栽培种配方杂木屑58%，枝条20%，麸皮20%，蔗糖1%，石膏1%，水分55%～60%。采用12cm×28cm规格聚乙烯袋或聚丙烯袋装料，培养基中加入粗1～2cm，长2～5cm小枝条，每袋可加入枝条20～30支。缝隙用杂木屑填满。原种、栽培种培养料灭菌一定要彻底，必须在严格的无菌条件下接种，菌种培养过程中勤查勤看挑去带杂菌的菌种，为生产提供优良菌种。
猪苓菌种同其它菌种一样，也是经过菌种分离（组织分离、孢子分离）而获得菌种，一般是采用野生或家种猪苓菌核分离或夏季雨后湿热天气采集猪苓子实体（俗称“猪苓花”或千层蘑菇）进行组织分离以及担孢子分离。
1.1 母种分离
1.1.1 制备培养基
采用PDA培养基或麸皮-葡萄糖培养基均可。①PDA培养基：马铃薯（削皮）200g，葡萄糖20g，琼脂12～15g，水1000mL，pH5.0～6.0。②麸皮-葡萄糖培养基：麸皮50g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1.5g，琼脂l2～15g，水1000mL培养基的制作和灭菌与常规方法相同。
1.1.2 分离方法
1.1.2.1 组织分离法有菌核分离和子实体分离
菌核分离：猪苓菌子实体采集受季节、天气影响有诸多不便，获得菌种多采用菌核分离，将菌核表面洗净，用75%的酒精消毒后，切开菌核，取中间黄豆粒大小的1块组织，无菌条件下接种到试管斜面上，在15～20℃的适温下培养，产生菌丝后进行分离纯化。子实体分离：利用子实体内部组织进行分离，是获得优质菌种的最好方法。选择七八分成熟、性状优良的子实体做种菇，用无菌水冲冼几次，并用无水滤纸吸干，然后把种菇撕开，用消毒小刀在菌盖与菌柄交界处或菌褶处切取一小块组织，用接种针将组织放入装有培养基的试管斜面中间，适温培养，当组织块上产生菌丝，并向培养基四周生长时，即可挑取斜面上菌丝的生长点进行转管和纯化。
1.1.2.2 孢子分离法
孢子分离要选择成熟度高，将要散孢子的优良子实体做种菇，通常采用钩悬法进行孢子分离，将种菇消毒后，取成熟子实体菌盖的几片菌褶，用无菌不锈钢丝悬挂于三角瓶（或广口瓶）内的培养基上方，勿使它接触到培养基和四周瓶壁。将瓶置于20℃的恒温箱中培养，待成熟的孢子落到培养基上，立刻在无菌条件下移去菌褶，孢子继续在瓶中培养，当长出菌丝后进行转管培养。猪苓菌种分离培养必须组织分离和孢子分离交替进行，至少三年进行一次孢子分离恢复其种性，据笔者调查长期的无性繁育是猪苓减产的最主要原因之一。
1.1.3 菌种纯化培养
在平板培养皿或试管培养基上最初分离出的菌种，经过选择后再进行纯化培养，以获得质量优良的纯菌种。菌种的纯化操作同样在无菌条件下进行，当猪苓在培养基上产生齐头并进的菌丝时，立即用接种针挑取其中长势旺盛菌丝茎尖部分，置于斜面试管培养基中央，在20℃恒温下培养10d左右，当菌丝长满整个培养基时，便是纯菌种即母种。
1.2 原种、栽培种的培养
原种基本配方：杂木屑78%，麸皮20%，蔗糖1%，石膏1%，水分55%～60%。获得母种后，一般制种户就能生产猪苓原种，因猪苓菌丝生长较慢，菌丝纤细，宜用透明玻璃瓶生产原种，以便观察去杂。栽培种配方杂木屑58%，枝条20%，麸皮20%，蔗糖1%，石膏1%，水分55%～60%。采用12cm×28cm规格聚乙烯袋或聚丙烯袋装料，培养基中加入粗1～2cm，长2～5cm小枝条，每袋可加入枝条20～30支。缝隙用杂木屑填满。原种、栽培种培养料灭菌一定要彻底，必须在严格的无菌条件下接种，菌种培养过程中勤查勤看挑去带杂菌的菌种，为生产提供优良菌种。
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