猪链球菌和猪大肠杆菌对19种药物的敏感性分析
发布: 2013-09-29 | 作者: 邬苏晓等 | 来源: 养猪
关键词：猪链球菌：猪大肠杆菌：药敏试验：耐药性
猪链球菌病和猪大肠杆菌病是猪场的多发病，常与其他细菌性疾病或病毒性疾病并发、给养猪业造成了严重的经济损失。近年来由于养猪生产中抗菌药物的泛用滥用，导致耐药菌株不断出现。细菌耐药性的出现和耐药细菌的感染常使经验性治疗难以奏效，大大增加了对该病防治的困难。本试验选取19种常用抗菌药物对韶关市猪场猪链球菌和猪大肠杆菌流行菌株进行药物敏感性研究和分析，旨在为兽医临床合理用药提供参考。
1材料与方法
1．1试验时间与地点
试验于2008年6月l5—24日在韶关学院农业科学系动物医学实验室进行。
1．2试验材料
1．2．1试验菌株猪链球菌和猪大肠杆菌来源于韶关地区猪场，由本实验室分离鉴定保存。
1．2．2培养基普通琼脂培养基、血琼脂培养基、LB培养基、血清LB培养基，按常规方法制备，置4℃冰箱保存备用。
1．2．3试剂及药物阿奇霉素等l9种药敏纸片，购于杭州天和微生物试剂有限公司；菌必治(头孢曲松)、复达欣(头孢他定)、先锋霉素V、阿米卡星(丁胺卡那霉素)、壮观霉素、氨苄青霉素、青霉素G粉针剂均购自韶关市千金大药房。
1．3试验方法
1．3．1被测菌种悬液的制备分别将猪大肠杆菌和猪链球菌培养液接种LB培养基与血清LB培养基，置37℃培养6~8 h，使生长浓度达9x108个／mL，用培养基进行1：1 000的稀释待用。
1．3．2抗菌药物原液的配制分别将抗菌药物制剂无菌操作溶于适宜的溶剂稀释至1 mg／mL浓度待用。
1．3．3纸片扩散法药物敏感试验分别吸取200μL稀释后的细菌悬液均匀涂布于普通琼脂培养基和血琼脂培养基表面，用无菌镊子取各药敏纸片均匀放置于培养基表面并轻轻按压，使其紧贴，置平皿于37℃恒温培养箱中培养16~18 h，观察结果。参考杭州天和微生物试剂有限公司提供的纸片法药敏试验抑菌圈直径判断标准。
1．3．4敏感抗菌药物最小抑菌浓度(MIC)测定采用试管二倍稀释法，分别选取猪链球菌和猪大肠杆菌敏感的4种药物进行MIC测定。分别取ll支灭菌试管，加入稀释后的被测菌种悬液各2 mL，在第l管加入2 mL浓度为1 mg／mL的抗菌药物原液，按照倍比稀释的方法使1～10管药物依次成1：2，1：4，…，1：1 024浓度梯度，第ll管作无药生长对照，并取第l2支试管作药物对照，于37℃培养16~18 h，观察结果。
2结果
2．1纸片扩散法药物敏感试验
结果表明，猪链球菌和猪大肠杆菌对本试验选用的l9种抗菌药物具有不同程度的耐药性，见表l。
2．2敏感抗菌药物最小抑茵浓度测定
采用试管二倍稀释法测定敏感抗菌药物MIC，以无菌生长的试管中药物的最低稀释浓度为其MIC。结果表明，所选7种药物均具有较低的MIC，其中以菌必治、壮观霉素和复达欣的MIC更低(表2)。
3小结与讨论
3．1采用纸片扩散法测定19种药物的抗菌敏感性，结果表明，韶关地区猪链球菌和猪大肠杆菌对猪场常用药物呈现多重耐药性，且具有一定的耐药率，其中猪链球菌为26．3％、猪大肠杆菌为36．8％。其中猪链球菌对氯霉素、林可霉素、罗红霉素、先锋霉素V和阿奇霉素具有明显的耐药性；猪大肠杆菌对罗红霉素、氨苄青霉素、青霉素G、羧苄青霉素、林可霉素、氯霉素和阿莫西林已产生严重的耐药性，对菌必治、先锋霉素V、复达欣、阿米卡星有较高的敏感度，对其他氨基糖苷类和喹诺酮类药物只表现一般的敏感度。
3．2猪链球菌病和猪大肠杆菌病是猪场的常见病，临床上治疗的一般措施是使用抗菌药物。近年来由于各种抗生素的广泛应用、大剂量的滥用和盲目用药及长期在饲料中添加抗菌药物，导致猪链球菌和猪大肠杆菌的耐药谱越来越广、耐药性越来越强、多重超强耐药菌株不断出现，这不仅提高了治疗成本，而且大大增加了防治的困难。
3．3综上所述，分离猪场流行菌株进行药敏试验，结合药物成本及操作的方便性选用敏感药物，并按照正确方法轮换使用，可提高防治效果和防止耐药性菌株的产生，对猪场治疗用药及预舫用药都有重要的指导意义。
