仔猪黄白痢是由致病性大肠杆菌引起的１周龄内初生仔猪拉黄痢和１月龄仔猪拉白痢为特征的急性致死性传染病。该病流行十分广泛，尤其是对规模化猪场的危害较严重，经济损失较大。该病易诊断，但预防和治疗效果均不理想，因大肠杆菌血清型很多，各血清型之间有效的交叉保护性差，猪场一旦出现病例就用大量的抗菌素治疗，引起耐药菌株持续存在和广泛流行，不易根除致病菌。据调查该病在我市各养猪场均有不同程度的发生，２００３年秋季和２００４年春季在大足、永川、荣昌的某三个猪场，仔猪黄白痢的发病率达６０％～８０％，死亡率达１５％～２０％，仔猪从３～５日龄开始排黄色或白色粥样粪便，病初只见个别仔猪腹泻，很快波及全群，多数仔猪由于剧烈腹泻而脱水，最后衰竭死亡。为了制定有效的防制方案，我们从永川和荣昌的发病猪场采集病料，进行病原菌分离鉴定和药敏试验。

　　１  材料与方法

　　１．１  材料

　　１．１．１  培养基  ＬＢ液体培养基、ＬＢ琼脂平板、麦康凯琼脂平板均按常规方法制备。

　　１．１．２  生化鉴定培养基  三糖铁琼脂斜面按常规方法制备，其他生化鉴定培养基由西南农业大学荣昌校区生物技术中心提供。

　　１．１．３  大肠杆菌标准菌株  含Ｋ８８ａｃ抗原，产生 ＬＴ和ＳＴ两种肠毒素，由西南农业大学荣昌校区生物技术中心提供。

　　１．１．４  大肠杆菌因子血清  购于成都生物制品研究所，批号：２００１０１０１。

　　１．１．５  药敏纸片  购于杭州天和微生物试剂有限公司。

　　１．１．６  实验动物  小白鼠购于西南农业大学荣昌校区实验动物科。健康家兔（体重２．０～２．５ｋｇ）购于本地养兔场。

　　１．１．７  病料  用灭菌棉签取患黄白痢严重而未经治疗的仔猪直肠粪便和患黄白痢死亡仔猪的肠内容物。

　　１．２  方法

　　１．２．１  细菌分离培养  将棉签采集的病料用灭菌的生理盐水洗下，在麦康凯平板上划线，３７℃培养２４ｈ。选择红色、圆形、光滑、中央隆起的单个菌落，作细菌涂片、革兰氏染色镜检，同时接种于ＬＢ琼脂平板，３７℃培养２４ｈ，即得细菌纯培养物。

　　１．２．２  动物接种  将细菌纯培养物接种ＬＢ液体培养基，３７℃摇振培养１８～２０ｈ，细菌培养液接种小白鼠，每只腹腔注射０．５ｍｌ，每株菌接种４只小白鼠，同时以ＬＢ液体培养基接种４只小白鼠作为对照，观察２４～４８ｈ，记录小白鼠发病及死亡情况，致小白鼠死亡的菌株判定为致病菌株。

　　１．２．３  家兔肠结扎试验  将致病菌株和含Ｋ８８ａｃ的标准菌株分别接种于ＬＢ液体培养基，３７℃摇振培养２４ｈ，细菌培养液１０ ０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清除菌过滤，滤液分成两份，一份６０℃加热３０ｍｉｎ，供ＳＴ测定用，另一份不加热，供ＬＴ测定用。
将两只体重２．０～２．５ｋｇ的健康家兔禁食２４ｈ，只给饮水，使肠内容物排空。保定、麻醉后剖腹，取出回肠段，按１０～１５ｃｍ为一段，先排开肠内容物，再分段结扎。取一段注射２ｍｌ ＬＢ液体培养基作为阴性对照，另一段注射已知产毒的Ｋ８８ａｃ培养物除菌滤液２ｍｌ作为阳性对照。其余各段分别注射待试菌株培养物的除菌滤液各２ｍｌ，将腹壁缝合。剖腹检查（测定ＳＴ的兔，于注射后６～８ｈ剖腹检查；测定ＬＴ的兔，于注射后１８ｈ剖腹检查）：取出肠管，分别抽取各肠段内的积液，测定体积，并测定肠段的长度。积液量（ｍｌ）与肠段长度（ｃｍ）之比值大于１者为阳性。

　　１．２．４  生化鉴定  将纯培养菌接种于三糖铁琼脂斜面及各种生化试验培养基，于３７℃培养２４ｈ，观察结果。

　　１．２．５  血清学鉴定  将纯培养细菌分别与大肠杆菌因子血清做玻片凝集试验，鉴定其血清型。

　　１．２．６  药敏试验  将各菌株纯培养液分别均匀地涂布接种于ＬＢ琼脂平板上，按药敏试验要求的距离贴上药敏纸片，于３７℃培养２４ｈ后，分别测量各个抑菌圈的直径。判定标准：抑菌圈直径＞１．５ｃｍ为高度敏感；１．０ｃｍ＜抑菌圈直径＜１．５ｃｍ为中度敏感；抑菌圈直径＜１．０ｃｍ为低度敏感；无抑菌圈为不敏感。

　　２  结果

　　２．１  细菌分离培养结果

　　病料接种于麦康凯琼脂平板，于３７℃培养２４ｈ后形成红色、圆形、光滑、湿润、中央隆起、中等大小的菌落。转接于ＬＢ琼脂平板上３７℃培养２４ｈ后得到纯培养菌，菌落呈圆形、光滑、湿润、隆起、半透明的近无色菌落。镜检呈革兰氏阴性短杆菌。

　　２．２  动物接种试验结果

　　试验采集的８份病料分离纯培养菌接种小白鼠，其中有３株菌能致死小白鼠，死亡率均为４／４，而对照组小白鼠均健活。这３株菌分别命名为ＹＣ１０２５、ＲＣ１１０２、ＲＣ１１０３。

　　２．３  家兔肠结扎试验结果

　　家兔肠结扎试验?穴表１?雪表明，ＹＣ１０２５菌株能产生ＳＴ和ＬＴ两种肠毒素，而ＲＣ１１０２和ＲＣ１１０３菌株只产生ＬＴ毒素。阳性对照Ｋ８８ａｃ菌株产生ＳＴ和ＬＴ两种肠毒素，阴性对照ＬＢ液体培养基为阴性。

　　２．４  生化试验结果

　　生化试验结果（表２）显示，分离的３株致病菌株均符合大肠杆菌的生化反应特性，但３菌株的生化反应结果不完全相同，菌株之间存在微小的差异。

　　２．５  血清学鉴定结果

　　用ＹＣ１０２５、ＲＣ１１０２、ＲＣ１１０３致病菌株纯培养物分别与大肠杆菌多价和单价血清做玻片凝集试验，ＹＣ１０２５菌株能与Ｏ１３８因子血清发生凝集反应，ＲＣ１１０２菌株能与Ｏ７８Ｋ８０因子血清发生凝集反应，ＲＣ１１０３菌株能与Ｏ２５Ｋ１９因子血清发生凝集反应。

　　２．６  药敏试验结果

　　试验结果（表３）表明，分离的３株致病性大肠杆菌对舒普深最敏感，其次是壮观霉素、先锋Ⅴ、先锋必、庆大霉素、利福平、新霉素，其余药品低敏或不敏感。

　　３  小结与讨论

　　（１）根据致病菌的分离培养特性、动物致病性试验、家兔肠结扎试验、生化鉴定和血清型鉴定结果，证实永川和荣昌的某两个猪场３～５日龄仔猪黄白痢是由致病性大肠杆菌引起的，分离的３株致病菌均能产生肠毒素，致病性极强。

　　（２）引起仔猪黄白痢的致病性大肠杆菌常见的Ｏ血清群有Ｏ８、Ｏ４５、Ｏ６４、Ｏ１９、Ｏ１３８、Ｏ１３９、Ｏ１４１、Ｏ１５７、Ｏ１４９等，多数具有Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ菌毛抗原和能产生肠毒素。Ｏ７８血清群多引起犊牛、羔羊、雏鸡、幼鹿下痢，Ｏ２５血清群多引起人和家禽下痢?眼１?演，引起仔猪黄白痢的报道极少。杨莲茹等?眼２?演从患黄白痢仔猪肠内容物中不仅分离到大肠杆菌Ｏ７８血清型，还分离到Ｏ１５血清型，致病性都很强。我们本次分离到Ｏ７８、Ｏ２５血清型均能产生ＬＴ肠毒素，致病性也很强。这些极少报道的大肠杆菌血清型对研究生产实践中如何防制仔猪黄白痢具有重要的意义。

　　（３）本次发生仔猪黄白痢的两个猪场母猪均未进行大肠杆菌多价疫苗免疫，且秋季和春季降雨较多，气候骤变，产房卫生条件较差，管理不善，诱导了仔猪黄白痢的发生。我们对分离的致病菌株进行了药敏试验，选择对致病菌株敏感的药物进行治疗，效果显著，但不稳定，停药后有一部分仔猪又出现腹泻，不能根本控制该病。大肠杆菌易变异和产生耐药性，使得药物疗效甚差，且需经常更换药物，提高了养猪生产的成本，同时患过该病的仔猪断奶重低于正常仔猪。因此防制该病的重点是消除该病的不良诱因，提高仔猪抵抗力，抓好母猪和产房环境卫生、搞好猪瘟等重大疫病的防疫工作。并不断分离本场的致病菌株，加上含Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ抗原的标准菌株研制“自家疫苗”免疫母猪，仔猪通过吃母乳获得很好的抗黄白痢免疫保护力。孙淑珍?眼３?演报道，对怀孕母猪预产期前１５ｄ肌注含５００亿个菌的灭活多联菌苗，同时口服此苗（５ ０００亿个菌）和产后３～７ｄ拌料口服加强免疫，可使仔猪发病率下降４７．３２％。朱玲等?眼４?演应用仔猪黄白痢大肠杆菌“自家疫苗”在母猪产前４周接种４ｍｌ，两周后再接种４ｍｌ，仔猪出生后即灌服微生态制剂５～１０ｍｌ／次，连续３～５次，于１０日龄接种“自家疫苗”２ｍｌ，可基本杜绝仔猪黄白痢的发生，且仔猪断奶重平均提高了０．６５ｋｇ。这些防疫措施均值得借鉴。