就用琼脂扩散试验诊断鸡住白细胞虫病
发布: 2010-04-03 | 作者: 本站搜集 | 来源: 本站搜集
1、抗原制备 选末稍血片中有典型住白细胞虫裂殖体，并表现出明显症状的10只病鸡，从翅静脉采血。待血液凝集后分离血清和血凝块，与其肝、脾、肾等肉脏混合，匀浆，用0.01mol/l(ph8.0)pbs离心洗涤3次，在沉淀物中加5倍体积的pbs，在振荡器上振荡5min，然后分别在50、100、150……500g/l不同浓度的蔗糖溶液中悬浮；吸取各层悬浮液经镜检以150g/l浓度的抗原每1ml含住白细胞虫裂殖子在1万个以上，并无其它杂质。在此悬浮液中加5倍体积的pbs，在-20℃与40℃反复冻融3次，分装，56℃灭能1h，即为住白细胞虫诊断抗原，置冰箱保存。 2、待检血清 除上述10只病鸡血清外，另从几个住白细胞虫病发病鸡场、可疑发病鸡场及未发病鸡场共采血280份，分离血清，56℃灭能30min，置冰箱备用。 3、琼脂扩散试验 参照禽病琼脂扩散试验方法制备琼脂板，打梅花孔，中央孔加住白细胞虫诊断抗原，周边孔加待检血清，留1孔加健康鸡血清作对照。加样后在室温放置2h，待样品扩散后放置温盒内，在37℃温箱继续扩散，每隔12h观察1次，直至72h。 4、抗原特异性检测 用制备的住白细胞中诊断抗原与新城疫免疫血清做hi、ha试验；用该抗原与鸡马立克氏病标准抗体、新城疫阳性血清依上述方法做琼脂扩散试验，结果均为阴性。 5、待检血清检测 用制备的住白细胞虫诊断抗原与确诊的10份病鸡血清做琼脂扩散试验，抗原孔与病鸡血清孔之间出现明显的沉淀线，而抗原孔与对照孔之间无沉淀线，用制备的住白细胞虫诊断抗原检测各鸡场采集的鸡血清，血清学检查阳性率与虫体检查的阳性符合率为88.0%。 6、小结 鸡住白细胞虫病在国内外报道不少，但其诊断方法的研究报道不多。我们应用琼脂扩散试验诊断鸡住白细胞虫病，与鸡新城疫、鸡马立克氏病抗体无交叉反应。试验结果表明，用琼脂扩散试验诊断鸡住白细胞虫病，快速、准备，可避免病原检查时因与异嗜中性白细胞混淆而造成的误诊。
