鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒
发布: 2010-04-03 | 作者: 杨明 | 来源: 《中国兽医杂志》
鸡传染性支气管炎病毒具有高度的传染性，能给雏鸡和防护较差的鸡群造成很高的死亡率。
FlockChek酶联免疫吸附试验试剂盒是专门用来确定禽群中鸡传染性支气管炎抗体水平的。常规的检测可以用红细胞凝集抑制试验。FlockChek*试剂盒，为抗体的定量提供了一种灵敏而特异的方法。该检测可以在2h之内完成，可用于检测鸡传染性支气管炎病毒疫苗免疫反应或野毒感染。可以用35日龄的样品进行抗体滴度范围基线的确立，依据所确定的抗体滴度范围的基线来监控肉鸡的疫苗反应。这些滴度数据有助于确定野毒感染的抗体动态与当前疫苗接种计划的相互关系。
通过对禽群定期进行血样采集以检测母源抗体水平的消减情况，以及监测肉种鸡和商业性蛋鸡的疫苗反应。在接种活疫苗以后，应该在5～6周龄和10周龄时分别采集血样进行检测，接种灭活疫苗后，应在接种后4～5周取样检测。进一步检测的时期可以定在25～30周龄、45周龄和55～60周龄。免疫力的持续时间应被确定，抗体滴度的变异系数，及其与野毒的相互作用也应被确定。这3个参数与鸡群生产性能及临床条件密切相关。
xChek是非常有效的软件，它可以将禽群的信息以数据库的形式保存起来，在需要的时候被提取出来，根据不同的禽群特征和农场可以提供不同的图片和不同的报告形式。一个禽群对于疫苗免疫反应的数据，可以以直方图的形式来表达，图上可以显示出禽群的特征、检测日期、被测样品的数目、平均滴度值和平均变异系数，而且有一个柱形图代表了滴定度于某一特定滴定范围的家禽的数目。
对那些接受了相同的疫苗接种禽群进行检测，比较各禽群之间滴度水平及其变异程度，以检测疫苗接种的效率。对于均匀的疫苗免疫反应其变异系数不高于40%～60%，而不正确的疫苗接种方法会导致禽群中变异系数的增加。如果一个禽群的变异系数高于60%，就表明该禽群有部分家禽具有弱的免疫反应，或根本就没有免疫反应，而其他家禽则具有较强的或适当的免疫反应。应用xChek，你可以对各个禽群进行比较，也可以与以前接种同一种疫苗的禽群进行比较，或者对疫苗免疫方法中的任何其他变量进行比较，比如饮水与喷雾，以及水滴大小的不同。
在加工场，每天都要对禽群随机取样(每个禽群取15个样品，标明来源地、农场、禽舍以及禽群名称），进行鸡传染性支气管炎抗体的检测。经过半年到一年的时间，基线可以被确定下来，确定了一个地理区域、禽群或农场“正常”的或预期的鸡传染性支气管炎病毒的抗体滴度。长期有规律地检测并分析禽群数据的改变，反映了某些农场或肉鸡场潜在的一些问题。这样有助于生物安全措施的不断更新，从而减少野毒株对禽群的威胁，也有助于根据疫苗毒株不同而改进疫苗接种计划，比如接种的日期、疫苗补强、疫苗接种方法的改进等等。通过在加工场进行检测，也可以追踪到抗体滴度的季节性变化。
图1显示了应用FlockChek*鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒对高、中、低滴度的检测结果。
图1 FlockChek*鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒基准线
在鸡传染性支气管炎病毒不很流行的地区，普遍存在着低滴度的鸡传染性支气管炎病毒抗体。H-120毒株常被应用来抑制鸡传染性支气管炎病毒的感染与传播。分析变异系数需要些滴度的平均值，而中等的变异系数(40%～60%)表明疫苗接种计划非常完好。如果变异系数很高，而平均滴度值却很低，表明需要加强疫苗接种工作的进行。如果平均滴度值中等，而变异系数很低，则表明近期可能受到了野毒的感染。如果变异系数很低，而平均滴度值很高，则可能与禽群的临床状况有关，因而生物安全防护措施需要加强。中等的变异系数与中等的滴度平均值，则表明已接种疫苗后的禽群受到了鸡传染性支气管炎病毒的感染，但是生物安全防护措施却允许农场多次受到病毒的侵袭。这种情况几乎在全进全出的农场中出现过，但是病毒的传播还是在可控制范围之内。中等滴度条件下，如果变异系数较低，则表明早期可能受到了病毒的感染，但实际的滴度值往往在中等偏上。
在欧洲，应用IDEXX公司的鸡传染性支气管炎病毒检测试剂盒，在肉鸡加工场对那些没有受到鸡传染性支气管炎病毒侵袭的鸡群进行测定，最常见的滴度值在500～1 000。在美国的某些地区的加工场检测的最常见的滴度值却为4 000～5 000。这些较高的滴度值可能与良好的疫苗免疫反应有关，以及与农场中残留的鸡传染性支气管炎病毒的作用有关。兽医们应根据实际工作经验，确立Flock Chek鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒的使用标准。如果鸡传染性支气管炎病毒的滴度值为5000～10000，那么农场中的鸡传染性支气管炎问题很有可能与田间所用鸡传染性支气管炎病毒活疫苗非常相似。应排除不当的操作而导致的疫苗反应及活疫苗本身造成的“摇摆反应（rolling infection）”，而使农场的滴度值增加。
过高的滴度值(12 000～20 000)常与鸡传染性支气管炎病毒变异株的感染有关，这些变异株与在活疫苗接种中所用不一样。当接种了灭活疫苗的肉种鸡和商品蛋鸡，仍面临着持续不断的鸡传染性支气管炎病毒的侵袭时，滴度值通常会很高，变异系数将会根据病毒侵袭时间和取样时期的不同而变化。
图2显示了不同类型的商品鸡的检测效果。它们在可以用来区分正常的疫苗免疫反应和野毒侵袭
图2 FlockChek*鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒与其他3种IBV商品试剂盒对低、中、高滴度样本的对比检测的滴度范围和准确度方面有明显差异。FlockChek*鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒可以区分出高、中、低的滴度。当农场由于病毒的侵袭而滴度升高时或是免疫不足时，或当活疫苗的摇摆反应导致了的肉鸡加工场淘汰率增加和呼吸系统疾病时，这些额外的功能可以帮助兽医分析问题。如果禽群的滴定度超过了10000，甚至达到了20000，那么就需要
进行鸡传染性支气管炎病毒PCR检测，以便确定其血清型，因为有可能是另外一种新的鸡传染性支气管炎病毒毒株所引起，而不是所用的活疫苗或灭活疫苗毒株。
已知的鸡传染性支气管炎病毒高、中、低滴度的血清样品，用4种市面上销售的鸡传染性支气管炎病毒酶联免疫吸附试验试剂盒进行分析。结果如图所示，在一个非常有意思的区域具有很好的扩张的动态范围，比如从中等滴度向较高滴度过渡的区域，可以得到一个非常好的解释。
研究结果表明：
(1)每一种鸡传染性支气管炎病毒酶联免疫吸附试验试剂盒都具有不同的中滴度和高滴度的定义。这也就是说，这4种试剂盒其基线是不同的，尤其是在解释中滴度和高滴度时。从一种试剂盒得到的滴度是不能直接用在其他鸡传染性支气管炎病毒检测试剂盒上的。
(2)IDEXX公司的FlockChek*鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒，可以很好地区分高、中、低滴度。这一点在检测真正的病毒侵袭过程中的灵敏度方面是非常重要的，从而使兽医不会将试验结果理解错误。
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