蜜环菌母种生产与转扩的改革方法
发布: 2015-01-16 | 作者: 佚名 | 来源: 转载
1.改试管斜面为试管菌柱由于蜜环菌母种能以菌索方式存在，菌索有输送氧气的能力。因此，蜜环菌母种培养可改用试管菌柱方式进行。试管菌柱制作减少了摆斜面的操作环节，菌柱高度与试管斜面同样只占试管1/2～3/5之间，用18mm×180mm试管装液量为18mL～20mL，20mm×200mm试管装液量23mL～25mL，装液量是试管斜面的2.5倍。试管菌柱培养的母种见图1，从而在同样的容器中提高了母种的生产数量，节约成本，提高效益。
2. 改固体方式为半固体方式。使用玉米粉100g、黄豆粉10g、麦麸80g、蔗糖(白糖)20g、水1000mL作培养蜜环菌母种的的配方。培养基的状态呈半固体状，具有流动性。先将称量好的玉米粉、黄豆粉、麦麸用适量水调匀。再添足水煮制，待煮沸时开始记时，保持35min即可，注意在加热过程中需不时搅拌，以免煮糊。注意适量添水，以补充加热过程中损失的水分。煮好后加入所需的蔗糖，趁热采用注射筒或其他装置分装。分装后塞好棉塞，将试管竖直放置。由于该培养基营养相当丰富，再加上玉米粉彻底灭菌相对较难。因此灭菌时间应比常规培养基稍长一点，一般将其控制在高压条件下0.15MPa下灭菌35min～40min。灭菌完成后，待冷却至试管不烫手时将其取出，竖直放置，待完全冷却后再开始接种操作。采用玉米粉等原料半固体方式培养的蜜环菌母种见图2。
3 .改PDA培养基为综合培养基。用传统的PDA、PDA加富、PDA+黄豆粉等培养基培养蜜环菌母种，菌种呈菌索状，菌索生长粗状，分枝也多，在菌柱表面分泌的色素多，易形成褐化及角质化。而用马铃薯100g、木屑50g、麦麸50g、玉米粉50g、琼脂10g、KH2PO42g、MgSO41g、VB110mg、水1000mL的综合配方培养蜜环菌母种，培养的母菌呈菌丝状，菌丝分枝细密，生长势强，日平均生长速度达 5.18mm·d－1。且经1年时间保藏失水不严重、耐贮藏，与PDA培养基配母种质量有显著差异，在推广中增产明显。
4 .改试管表面转扩为试管底部破碎转扩。鉴于蜜环菌母种从试管表面接种易污染的现实，笔者进行了多次改从试管底部破碎转扩试验，成功率高达98%。具体操作步骤如下:第一步挑选健壮的母种试管;第二步在试管下半部菌柱的部位用宽透明胶带缠绕并用75%酒精消毒;第三步在超净工作台或接种箱中敲碎管底，无菌操作中一只手拿试管口棉塞处，另一只手用镊子从试管底部破碎处挑取母菌进行转扩接种。
2. 改固体方式为半固体方式。使用玉米粉100g、黄豆粉10g、麦麸80g、蔗糖(白糖)20g、水1000mL作培养蜜环菌母种的的配方。培养基的状态呈半固体状，具有流动性。先将称量好的玉米粉、黄豆粉、麦麸用适量水调匀。再添足水煮制，待煮沸时开始记时，保持35min即可，注意在加热过程中需不时搅拌，以免煮糊。注意适量添水，以补充加热过程中损失的水分。煮好后加入所需的蔗糖，趁热采用注射筒或其他装置分装。分装后塞好棉塞，将试管竖直放置。由于该培养基营养相当丰富，再加上玉米粉彻底灭菌相对较难。因此灭菌时间应比常规培养基稍长一点，一般将其控制在高压条件下0.15MPa下灭菌35min～40min。灭菌完成后，待冷却至试管不烫手时将其取出，竖直放置，待完全冷却后再开始接种操作。采用玉米粉等原料半固体方式培养的蜜环菌母种见图2。
3 .改PDA培养基为综合培养基。用传统的PDA、PDA加富、PDA+黄豆粉等培养基培养蜜环菌母种，菌种呈菌索状，菌索生长粗状，分枝也多，在菌柱表面分泌的色素多，易形成褐化及角质化。而用马铃薯100g、木屑50g、麦麸50g、玉米粉50g、琼脂10g、KH2PO42g、MgSO41g、VB110mg、水1000mL的综合配方培养蜜环菌母种，培养的母菌呈菌丝状，菌丝分枝细密，生长势强，日平均生长速度达 5.18mm·d－1。且经1年时间保藏失水不严重、耐贮藏，与PDA培养基配母种质量有显著差异，在推广中增产明显。
4 .改试管表面转扩为试管底部破碎转扩。鉴于蜜环菌母种从试管表面接种易污染的现实，笔者进行了多次改从试管底部破碎转扩试验，成功率高达98%。具体操作步骤如下:第一步挑选健壮的母种试管;第二步在试管下半部菌柱的部位用宽透明胶带缠绕并用75%酒精消毒;第三步在超净工作台或接种箱中敲碎管底，无菌操作中一只手拿试管口棉塞处，另一只手用镊子从试管底部破碎处挑取母菌进行转扩接种。
